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PCR EN TIEMPO REAL

PCR EN TIEMPO REAL

La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés (polymerase chain reaction), es una técnica de biología molecular desarrollada en 1987 por Kary Mullis,¹ cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.

Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.

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                                           Micosis Superficiales 

Los hongos de las micosis superficiales se propagan por infección y por extensión periférica de las lesiones primitivas.Cuando producen lesiones inflamatorias dejan pasar a la circulación antígenos que sensibilizan a todo el organismo.Concomitantemente al desarrollo de la hipersensibilidad comienzan a aparecer anticuerpos circulantes y fenómenos celulares de resistencia específica adquirida. De todos modos no es de rutina para arribar al diagnóstico, la búsqueda de respuesta serológica en estos casos.

Luego de la anamnesis y la decisión de realizar el estudio micológico por parte del médico se procede a tomar la muestra, que en este caso serán pelos, escamas de piel o muestras ungueales, que se toman con pinzas o bisturí estéril del centro o borde de la lesión y se colocan en un portaobjetos.

Se transportan entre dos portaobjetos limpios, y se observa directamente al microscopio, con una gota de hidróxido de potasio (KOH) al 20-40%, cubierto con un cubreobjeto. El KOH disuelve la queratina y permite visualizar los elementos fúngicos. Se flamea suavemente el portaobjeto hasta la aparición de burbujas y se observa con aumento de 400x.

La luz de Wood (luz ultravioleta de 365 nm de longitud de onda) se utiliza para identificar hongos de los géneros Microsporum y Trichophyton, dando fluorescencia verdosa, y lesiones producidas por Malassezia furfur, siendo la coloración amarillenta en este caso.El cultivo se realiza en medios ricos en lípidos con agregado de antibióticos  a 28 o 37ºC durante no menos de cuatro semanas. Finalmente se identifica por los caracteres morfológicos del hongo aislado.

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